研究背景

細胞能量代謝研究對于理解細胞代謝途徑和藥物作用機制具有重要意義。能量代謝物（如ATP、ADP等）在液相質(zhì)譜分析中易與金屬離子絡合，導致分析靈敏度降低。

實驗方法

1. 液相色譜條件：

   - 流動相：A相為90%水（含20 mM乙酸銨和5 μM亞甲基二膦酸），B相為90%乙腈（含20 mM乙酸銨和5 μM亞甲基二膦酸）。

   - 流速：0.3 mL/min。

   - 柱溫：40℃。

   - 梯度洗脫：通過表1所示的時間和流動相比例進行梯度洗脫。

2. 質(zhì)譜條件：

   - 數(shù)據(jù)采集方法：多反應監(jiān)測（MRM）。

   - 離子源：電噴霧離子源（ESI），正負模式切換。

實驗結果

1. 峰型和靈敏度：

   - 通過優(yōu)化流動相條件（加入亞甲基二膦酸），顯著改善了能量代謝物的峰型，提高了檢測靈敏度。

   - 正離子模式和負離子模式下目標化合物的提取離子流圖分別見圖1和圖2。

2. 數(shù)據(jù)分析：

   - 對12個細胞樣品（6個給藥組和6個對照組）進行靶向分析。

   - 通過統(tǒng)計分析（p-value < 0.01和VIP > 1），篩選出92種顯著變化的代謝物。

   - 熱圖（圖3）顯示，給藥組和對照組之間存在顯著差異。在top 25化合物中，給藥組中腺苷、鳥苷等14種物質(zhì)含量升高，而脫氧鳥苷三磷酸、甘氨酸等11種物質(zhì)含量降低。

方法特點及優(yōu)勢

1. 檢測能力：

   - 在SCIEX Triple Quad™ 6500+系統(tǒng)上建立了330種能量代謝物的檢測方法，適用于高通量靶向分析。

2. 性能優(yōu)勢：

   - 該系統(tǒng)具有高靈敏度和強抗基質(zhì)干擾能力。

   - 簡化了樣品前處理流程，回收率和儀器重復性良好。

   - 本土化產(chǎn)品性能與進口產(chǎn)品相當，為能量代謝物的差異分析提供了快速可靠的方法。

結論

本文建立的檢測方法能夠高效準確地分析細胞能量代謝物的變化，為藥物作用機制研究提供了有力工具。